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cck8試劑實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的疑難解答（一）News
cck8試劑實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的疑難解答（一）
更新時(shí)間：2018-03-12 點(diǎn)擊次數(shù)：9348次
對(duì)于cck8試劑的使用相比于多用戶(hù)都充滿(mǎn)了疑惑，在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中也經(jīng)常會(huì)遇到一些難題，寸步難行，今天呢小編就總結(jié)下實(shí)驗(yàn)中客戶(hù)常見(jiàn)問(wèn)題相關(guān)疑問(wèn)解答供大家參考下吧
1.cck8試劑與胸苷結(jié)合檢測(cè)之間是否有相關(guān)性？
有。然而，請(qǐng)注意由于cck8試劑使用的檢測(cè)原理與胸苷檢測(cè)的不同，因此結(jié)果可能不同。
2.cck8試劑能否檢測(cè)細(xì)菌細(xì)胞？
可以檢測(cè)E.coli，但不能檢測(cè)酵母細(xì)胞。向100 μl E.coli培養(yǎng)液中加入10 μl cck8試劑溶液，并培養(yǎng)1-4個(gè)小時(shí)或guo夜。
3.cck8試劑穩(wěn)定嗎？
cck8試劑在0-5℃下能夠保存至少6個(gè)月，在-20℃下避光可以保存1年。如果需要長(zhǎng)期保存，我們推薦-20℃的儲(chǔ)藏條件。
4.如果沒(méi)有450 nm的濾光片，還可以使用哪些其他濾光片？
還可使用450 nm到490 nm之間的濾光片。
5.如何減少由于cck8試劑在槍頭上或孔壁上的殘留所帶來(lái)的誤差？
可以在加樣前用培養(yǎng)基稀釋cck8試劑并混勻后加樣。
6.cck8試劑是什么顏色？
應(yīng)該是粉紅色。若顏色不一樣，有可能會(huì)影響測(cè)定。
7.CCK8能否對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行染色？
不能。因?yàn)镃CK8的主要成分是一種水溶性的四唑鹽 (WST8)，并通過(guò)電子載體1Methoxy PMS將活細(xì)胞中的電子交換到培養(yǎng)基中的WST8上。由于生成的甲ā也是高度水溶性的，因此CCK8不能對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色。
8.CCK8檢測(cè)溶液對(duì)細(xì)胞是否有毒？
CCK8溶液自身因?yàn)楦邼舛鹊?Methoxy PMS的存在而具有一點(diǎn)毒性。但是，加到培養(yǎng)基中的CCK8是沒(méi)有毒性的，因?yàn)楸幌♂屃?0倍。因此，長(zhǎng)時(shí)間的培養(yǎng)，如隔夜或者培養(yǎng)數(shù)天是可以的。同一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)液在CCK8檢測(cè)后還可以用于其他細(xì)胞增殖檢測(cè)，如結(jié)晶紫檢測(cè)，中性紅檢測(cè)或者DNA熒光檢測(cè)等。由于每種細(xì)胞對(duì)于CCK8的耐受力都不同，因此在需要進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)時(shí)，先檢測(cè)一下細(xì)胞在加入CCK8培養(yǎng)后的活力。
9.在做加藥實(shí)驗(yàn)時(shí)，藥物對(duì)測(cè)定是否有影響？如何解決？
有時(shí)會(huì)有影響。如果藥物具有還原性，會(huì)和CCK8發(fā)生顯色反應(yīng)，增加吸光度。解決辦法：首先要確認(rèn)藥物是否有吸收，在含有藥物的培養(yǎng)基中加入CCK8，測(cè)定450 nm的吸光度，如果它的吸光度比不含藥物的培養(yǎng)基 (加CCK8)的吸光度高，則證明藥物有影響，可在加CCK8之前更換培養(yǎng)基，去掉藥物的影響。
10.每次測(cè)定的數(shù)值不一樣，是什么原因？如何解決？
可能會(huì)有以下幾個(gè)原因： 1. 當(dāng)在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)板zui外一圈的孔zui容易干燥揮發(fā)，由于體積不準(zhǔn)確而增加誤差。 一般情況下，zui外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測(cè)定孔用。 2. 有可能會(huì)因?yàn)镃CK8沾在壁上而產(chǎn)生誤差，建議在加入CCK8后，輕輕敲擊培養(yǎng)板以幫助混勻。 3. 每孔的細(xì)胞數(shù)量過(guò)多或過(guò)少。請(qǐng)預(yù)先在1,000100,000個(gè)/孔范圍內(nèi)摸索條件。
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